葡萄糖苷酶阳性(葡萄糖糖苷酶阳性)

没食子酸是黑茶的主要成分之一，具有特殊的健康调理调节功效，对α-葡萄糖苷酶具有抑制作用，存在降血糖的利用前景。

以下内容来自《中国药业》期刊2011年11月第21期第8~10页“没食子酸对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其降糖机制研究”（第四军医大学唐都医院，张海凤.等）。

采用酶-抑制剂模型和Caco-2细胞模型研究没食子酸对α-葡萄糖苷酶活力的影响，探索没食子酸在治疗糖尿病方面的应用前景。

一、方法

分别建立酶-抑制剂模型和Caco-2细胞模型，各自设立相应的空白组、阴性对照组、阳性对照组和试验组。

酶-抑制剂模型：于96孔培养板上进行反应，实验计算模型中没食子酸对α-葡萄糖苷酶活力的抑制作用。

空白组每孔加入磷酸盐缓冲溶液 200 μL；

阴性对照组加入磷酸盐缓冲溶液和α-葡萄糖苷酶溶液各40μL，37℃反应10min后加入120μL麦芽糖作为底物，37℃反应15min；

阳性对照组先加阿卡波糖溶液和α-葡萄糖苷酶溶液各40μL，阿卡波糖终浓度为250μg/mL，其余步骤同阴性对照组；

试验组先加入不同浓度没食子酸溶液和α-葡萄糖苷酶溶液各40μL，使没食子酸的终浓度分别为250、500、1000μg/mL，其余步骤同阴性对照组。

反应结束后，各组均加入1.0mol/L Tris－HCl 50μL终止反应，取50μL反应液，分别加入200μL的血糖试剂工作液中，37℃反应30min后在490nm波长处测定。

Caco-2细胞模型：Caco-2细胞接种于24孔板上（4×104个/孔），4d后融合，继续培养至12d。试验前移去培养液，细胞用磷酸盐缓冲溶液洗3次，除去细胞表面的附着物。

空白组每孔加入1.0mL磷酸盐缓冲溶液；

阴性对照组每孔加入800μL底物和200μL磷酸盐缓冲溶液；

阳性对照组每孔加入800μL底物和200μL阿卡波糖溶液，使其终浓度为250μg/mL；

试验组每孔加入800μL底物和200μL没食子酸溶液，使没食子酸终浓度为250、500、1000μg/mL。

置37℃反应40min后移入冰浴，迅速吸出反应液50μL，分别加入200μL的血糖试剂工作液中，37℃反应30min，在490nm波长处测定。

实验计算没食子酸对葡萄糖吸收的抑制作用；在T5培养瓶中的单层细胞上进行实验，最终分别测定细胞中葡萄糖含量和细胞蛋白含量。

二、效果

①微量筛选模型：没食子酸对以麦芽糖为底物时的α-葡萄糖苷酶有一定的抑制作用，但实验浓度范围的抑制率均弱于阿卡波糖。没食子酸半数抑制量（IC50）为577.5μg/mL；试验浓度下的没食子酸对细胞无明显的毒性。

②Caco-2细胞模型：以麦芽糖为底物时，没食子酸对Caco-2细胞所表达的α-葡萄糖苷酶有一定的抑制作用。质量浓度为250、500、1000ug/mL的抑制率分别为57.43%、56.23%、98.24%；而阿卡波糖250ug/mL的抑制率84.08%。

③Caco-2单层细胞模型上葡萄糖吸收：以葡萄糖为糖源时，阳性药根皮苷通过抑制葡萄糖载体功能可显著降低葡萄糖的吸收，阿卡波糖也有此作用，试验条件下不同质量浓度没食子酸也有此作用，且呈一定的剂量依赖关系。抑制葡萄糖吸收的大剂量1000μg/L浓度没食子酸效果最佳，其次为500μg/L浓度没食子酸和200ug/mL根皮苷，后两组无显著性差异。

三、结论

由于Caco-2细胞具有与人小肠上皮细胞相似的糖消化、吸收和葡萄糖异生相关酶，故可利用其表达的α-葡萄糖苷酶构建模型，研究没食子酸对α-糖苷酶的作用。

没食子酸可抑制α-葡萄糖苷酶活性，还可抑制葡萄糖转运载体，从而减少葡萄糖摄取、吸收，通过多个途径发挥降糖作用，其效果还有待于动物实验的验证。

（备注：没食子酸作为黑茶的主要成分之一，可协同黑茶中的茶色素、茶多酚、茶多糖等成分，对于调节机体糖代谢的均衡，充分发挥更好的作用。）

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