盐酸丙卡特罗(盐酸卡丙特罗是激素吗)

本发明涉及盐酸丙卡特罗中间体有关物质的检测方法，具体涉及8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮中有关物质的检测，属于医药领域。

背景技术：

：随着环境的恶化以及病毒的快速变异，世界范围内支气管哮喘和慢性支气管炎类疾病增长趋势明显，治疗此类疾病的止咳平喘类药需求快速增长。目前，世界医药市场止咳平喘药物销售增加最快的为β2受体兴奋剂。盐酸丙卡特罗为第三代β2受体激动剂，系目前临床上一线止咳平喘药。与第一第二代β2受体激动剂相比，其特点选择性高、作用时间长、几乎无不良反应。作为平喘药物，还有止咳、化痰、抗过敏的作用。盐酸丙卡特罗对支气管平滑肌的β2肾上腺素受体有较高的选择性，能够舒张支气管平滑肌，并具有一定的抗过敏作用和促进呼吸道纤毛运动作用，已被批准用于于支气管哮喘、喘息性支气管炎、伴有支气管反应性增高的急性支气管炎、慢阻肺等疾病的治疗。盐酸丙卡特罗的化学名称为5-(1-羟基-2-异丙胺基丁基)-8-羧基喹诺酮盐酸盐半水合物，分子式为c16h22n2o3·hcl·1/2h2o，结构式如下：化学名称为8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮的物质是合成盐酸丙卡特罗原料药的关键中间体，为确保盐酸丙卡特罗api的质量，需要控制中间体8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮的有关物质，以免其含有的有关物质过大，参与下步反应而形成副产物，造成盐酸丙卡特罗api有关物质超标。

8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮的化学结构式如下：解析盐酸丙卡特罗中间体的化学结构和其合成工艺发现：该中间体至少含有a、b、c三个有关物质，开发该3个有关物质的分析检测方法，并进行定性定量分析，可严格控制中间体8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮的质量品质，从而保证终产品盐酸丙卡特罗api的质量符合要求。技术实现要素：为了有效控制盐酸丙卡特罗中间体8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮的质量品质，进而控制盐酸丙卡特罗的质量，本发明提供了一种盐酸丙卡特罗中间体8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮有关物质的检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，具体步骤如下：a、供试品溶液制备：取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮，加乙腈水溶液溶解，即得；b、系统适用性溶液的制备：取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮对照品和有关物质对照品，用乙腈水溶液溶解，即得；c、分别吸取供试品溶液和系统适用性溶液注入色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以0.01～1.0％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b；梯度洗脱程序为：0～15min，95～85％→80～60％a，15～25min，80～60％→30～10％a，25～31min，30～10％a，31.01～40min，95～85％a。

其中，检测波长：240～260nm；流速为0.5～1.5ml/min；柱温为30～40℃。进一步地，步骤a)所述8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮与乙腈水溶液的质量体积比为0.3～1.0mg：1ml。更进一步地，所述乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为35：65。进一步地，步骤b)所述有关物质为杂质a、杂质b和/或杂质c；所述系统适用性溶液每1ml含杂质a、杂质b或杂质c1～5μg，8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮0.3-0.8mg。进一步地，所述色谱柱为inertsilods-3，规格4.6×250mm，5um；所述流动相a为0.05～0.08％三氟乙酸水溶液，优选0.05％三氟乙酸水溶液。进一步地步骤c)所述检测波长为259nm，进样量20ul，流速为0.5～1.5ml/min；柱温为30～40℃，优选：流速为1.0～1.5ml/min，柱温为35℃。更进一步地，所述流速为1.0或1.1ml/min。进一步地，步骤c)所述梯度洗脱程序为：0～15min，90％→65％a，15～25min，65％→20％a，25～31min，20％a，31.01～40min，90％a。

进一步地，所述供试品溶液的色谱图中呈现与系统适用性溶液色谱图中有关物质色谱峰保留时间相对应的色谱峰，即供试品中含有相应有关物质。本发明还提供了一种盐酸丙卡特罗有关物质的含量测定方法，具体操作步骤如下：1)按前述方法检测；2)计算有关物质含量，计算公式如下：其中，xi％：供试品中有关物质的含量，ai：供试品溶液中有关物质峰面积，a：供试品溶液中所有峰面积之和，fi:有关物质的校正因子。进一步地，所述有关物质为杂质a，其校正因子为1.48，有关物质为杂质b，其校正因子为0.39，有关物质为杂质c，其校正因子为0.52。本发明检测方法可以将8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮与其有关物质峰有效分离，准确测定有关物质含量，测定结果稳定可靠，专属性强，方法学验证结果表明，本发明符合《中国药典》2015年版对分析方法学的要求，从而可有效控制盐酸丙卡特罗中间体的质量，提高盐酸丙卡特罗原料药的质量品质，同时可有效监控盐酸丙卡特罗的中间体合成过程和盐酸丙卡特罗原料药的合成过程。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。附图说明图1实施例1供试品溶液hplc图图2实施例2供试品溶液hplc图图3实施例3供试品溶液hplc图图4对比例1分离度溶液hplc图图5空白溶液hplc图图68-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮系统适用性溶液hplc图具体实施方式(1)材料8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮样品(成都惟邦药业有限公司提供，批号wb50030501，wb50030502，wb50030601)有关物质a对照品(成都惟邦药业有限公司提供，批号wbz005a)有关物质b对照品(成都惟邦药业有限公司提供，批号wbz006a)有关物质c对照品(成都惟邦药业有限公司提供，批号wbz007a)(2)主要仪器高效液相色谱仪：岛津lc-20at，色谱柱：inertsilods-34.6×250mm，5um。实施例1盐酸丙卡特罗中间体8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮的含量测定a、供试品溶液制备：精密称取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮样品(批号wb50030501)，加体积比35：65的乙腈和水的混合溶液溶解，配制成0.5mg/ml的溶液，即得；b、系统适用性溶液的制备：分别称取有关物质a，b，c对照品，加体积比35：65的乙腈和水的混合溶液溶解，配制成浓度为100μg/ml的溶液，作为有关物质储备液。

精密称取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮对照品25mg于50ml量瓶中，精密加入有关物质储备液1.25ml，加稀释液稀释定容，即得；c、分别吸取供试品溶液和系统适用性溶液注入色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：inertsilods-3，规格4.6×250mm，5μm；流动相：流动相a：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相b：乙腈，检测波长：259nm柱温箱：35℃，色谱柱流量：1ml/min，进样量20μl梯度洗脱条件为：时间(min)流动相b(％)流动相a(％)0.5258.0d、根据色谱图(图1)计算有关物质含量，计算方式如下：其中，xi％：供试品中有关物质的含量，ai：供试品溶液中有关物质峰面积，a：供试品溶液中所有峰面积之和，fi:有关物质的校正因子。计算结果：8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮样品批号wb50030501的有关物质含量分别为：有关物质a＝0.16％，有关物质b＝1.2％，有关物质c＝0.20％。(fa＝1.48，fb＝0.39，fc＝0.52)实施例2盐酸丙卡特罗中间体8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮的有关物质测定a、供试品溶液制备：精密称取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮样品(批号wb50030502)，加体积比35：65的乙腈和水的混合溶液溶解，配制成0.5mg/ml的溶液，即得；b、系统适用性溶液的制备：分别称取有关物质a，b，c对照品，加体积比35：65的乙腈和水的混合溶液溶解，配制成浓度为100μg/ml的溶液，作为有关物质储备液。

精密称取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮对照品25mg于50ml量瓶中，精密加入有关物质储备液1.25ml，加稀释液稀释定容，即得；c、分别吸取供试品溶液和系统适用性溶液注入色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：inertsilods-3，规格4.6×250mm，5μm；流动相：流动相a：0.06％三氟乙酸水溶液，流动相b：乙腈，检测波长：259nm，柱温箱：35℃，色谱柱流量：1ml/min，进样量20μl梯度洗脱条件为：时间(min)流动相b(％)流动相a(％)0.525821831802031.8d、根据色谱图(图2)计算有关物质含量，计算方式如下：其中，xi％：供试品中有关物质的含量，ai：供试品溶液中有关物质峰面积，a：供试品溶液中所有峰面积之和，fi:有关物质的校正因子。计算结果：8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮样品批号wb50030502的有关物质含量分别为：有关物质a＝0.16％，有关物质b＝1.1％，有关物质c＝0.20％。(fa＝1.48，fb＝0.39，fc＝0.52)实施例3盐酸丙卡特罗中间体8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮的有关物质测定a、供试品溶液制备：精密称取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮样品(批号wb50030601)，加体积比35：65的乙腈和水的混合溶液溶解，配制成0.5mg/ml的溶液，即得；b、系统适用性溶液的制备：分别称取有关物质a，b，c对照品，加体积比35：65的乙腈和水的混合溶液溶解，配制成浓度为100μg/ml的溶液，作为有关物质储备液。

精密称取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮对照品25mg于50ml量瓶中，精密加入有关物质储备液1.25ml，加稀释液稀释定容，即得；c、分别吸取供试品溶液和系统适用性溶液注入色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：inertsilods-3，规格4.6×250mm，5um；流动相：流动相a：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相b：乙腈，检测波长：259nm，柱温箱：35℃，色谱柱流量：1.1ml/min，进样量20ul梯度洗脱条件为：时间(min)流动相b(％)流动相a(％)0.8258.0d、根据色谱图(图3)计算有关物质含量，计算方式如下：其中，xi％：供试品中有关物质的含量，ai：供试品溶液中有关物质峰面积，a：供试品溶液中所有峰面积之和，fi:有关物质的校正因子。计算结果：8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮样品批号wb50030601的有关物质含量分别为：有关物质a＝0.16％，有关物质b＝1.2％，有关物质c＝0.21％。(fa＝1.48，fb＝0.39，fc＝0.52)对比例1盐酸丙卡特罗中间体8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮的有关物质测定a、空白溶液(下述稀释液)：乙腈：水＝35:65(v/v)b、有关物质储备液：精密称取有关物质a，b，c各10mg于100ml量瓶中，稀释液溶液并定容(有关物质a：100ug/ml，有关物质b：100ug/ml，有关物质c：100ug/ml)。

c、系统适用性溶液：精密称取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮对照品25mg于50ml量瓶中，精密加入有关物质储备液1.25ml，加稀释液稀释定容。(8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮0.5mg/ml，有关物质a，b，c各2.5ug/ml)d、分别吸取空白溶液和系统适用性溶液注入色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：inertsilods-3，规格4.6×250mm，5um；流动相：流动相a：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相b：乙腈，检测波长：259nm，柱温箱：35℃，色谱柱流量：1.0ml/min，进样量20ul梯度洗脱条件为：时间(min)流动相b(％)流动相a(％)0.5258.0结果：色谱图(图4)中出现未知杂质干扰杂质c的检测，在梯度洗脱程序为：0～15min，95～85％→80～60％a，15～25min，80～60％→30～10％a，25～31min，30～10％a，31.01～40min，95～85％a范围外进行洗脱，分离效果不好，影响检测的准确性。以下通过试验例的方式进一步说明本发明的有益效果：实验例1系统适用性仪器：岛津lc-20at，色谱柱：inertsilods-34.6×250mm，5um，流速：1.0ml/min，色谱柱温度：35℃，进样量20ul，检测器波长：259nm，流动相a：0.05％三氟乙酸水溶液流动相b：乙腈，梯度洗脱条件如下：(1)空白溶液(下述稀释液)：乙腈：水＝35:65(v/v)(2)有关物质储备液：精密称取有关物质a，b，c各10mg于100ml量瓶中，稀释液溶液并定容(有关物质a：100ug/ml，有关物质b：100ug/ml，有关物质c：100ug/ml)。

(3)系统适用性溶液：精密称取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮对照品25mg于50ml量瓶中，精密加入有关物质储备液1.25ml，加稀释液稀释定容。(8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮0.5mg/ml，有关物质a，b，c各2.5ug/ml)(4)有关物质定位溶液：分别称取有关物质a，b，c各1.25mg分别置于100ml量瓶，加稀释液溶解定容。(有关物质a：25ug/ml，有关物质b：25ug/ml，有关物质c：25ug/ml)(5)供试品溶液：精密称取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮25mg于50ml量瓶中，加稀释液溶液定容。按色谱条件进样空白溶液，系统适用性溶液，样品溶液，记录色谱过程，结果见表1。图5-6。表1系统适用性实验例2专属性实验条件，液相色谱方法和溶液配制如实验例1方法专属性考察峰鉴别和选择性，分别进样空白溶液，有关物质定位溶液，记录色谱图，结果见表2。表2专属性实验例3检测限和定量限实验条件，液相色谱方法和溶液配制如实验例1对于已知有关物质，检测限(lod)和定量限(loq)根据信噪比来确定。

把已知浓度的有关物质储备液稀释到低浓度进样，检测信噪比s/n≥10确定为定量限，s/n＝2～4确定为检测限。对于未知有关物质，用8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮代替考察单个未知有关物质的检测限和定量限。测试结果见表3。表3定量限和检测限实验例4线性和范围实验条件，液相色谱方法和溶液配制如实验例1对于已知有关物质，在loq浓度至不低于150％指标浓度范围内取6个点进行研究，线性关系以测得的响应信号(峰面积)对被分析物浓度的函数作图，用最小二乘法进行线性回归，至少报告相关系数r2来证实良好的线性关系,要求该线性回归系数r2应不小于0.990。对于未知有关物质，采用8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮来代替未知有关物质的线性和范围，结果见表4。表4线性与范围有关物质校正因子名称线性方程斜率校正因子主成分(既未知杂质)396591.00(未知杂质默认为1.00)有关物质a268011.48有关物质b1021240.39有关物质c763180.52实验例5精密度实验条件，液相色谱方法和溶液配制如实验例1取分离度溶液作为供试品溶液，平行配制6份，依次进样，重复性结果见表5表5重复性序列有关物质a有关物质b有关物质cmax未知单杂10.480.510.490.2320.480.490.50.2430.490.50.50.2440.470.510.510.2550.480.510.490.2460.480.510.510.23rsd％1.321.661.793.16中间精密度采用相同操作方法，由不同人员在不同仪器上进行，结果见表6表6中间精密度实验例6准确度实验条件，液相色谱方法和溶液配制如实验例1准确度是通过在供试品中加入指标的80％，100％，120％三个不同浓度有关物质，测定有关物质的回收率所得。

已知有关物质的准确度是加入已知量的有关物质，再测定加样样品中已知有关物质的含量和理论值之间的比值(回收率)，以百分率％表达。未知有关物质是用8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮来代替的。结果见表7表7准确度实验例1～5的研究结果表明，本发明一种测定8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮有关物质的方法具有很好的专属性，精密度良好，准确度高和灵敏度高，可适用于原料药合成中有关物质的质量控制。综上，本发明符合《中国药典》2015年版对分析方法学的要求，从而可有效控制盐酸丙卡特罗中间体的质量，提高盐酸丙卡特罗原料药的质量品质，同时可有效监控盐酸丙卡特罗的中间体合成过程和盐酸丙卡特罗原料药的合成过程。当前第1页12

技术特征：

1.一种盐酸丙卡特罗中间体有关物质的检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，具体步骤如下：

a、供试品溶液制备：取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮，加乙腈水溶液溶解，即得；

b、系统适用性溶液的制备：取8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮对照品和有关物质对照品，用乙腈水溶液溶解，即得；

c、分别吸取供试品溶液和系统适用性溶液注入色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相：以0.01～0.1％三氟乙酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b；

梯度洗脱程序为：0～15min，95～85％→80～60％a，15～25min，80～60％→30～10％a，25～31min，30～10％a，31.01～40min，95～85％a；

检测波长：240～260nm。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤a)所述8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮与乙腈水溶液的质量体积比为0.3～1.0mg：1ml。

3.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为35：65。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤b)所述有关物质为杂质a、杂质b和/或杂质c；所述系统适用性溶液每1ml含杂质a、杂质b或杂质c1～5μg，8-苄氧基-5-((2-异丙氨基)丁酰基)喹啉-2(1h)-酮0.3～0.8mg。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱柱为inertsilods-3，规格4.6×250mm，5μm；所述流动相a为0.05～0.08％三氟乙酸水溶液，优选0.05％三氟乙酸水溶液。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤c)所述检测波长为259nm，进样量20ul，流速为0.5～1.5ml/min；柱温为30～40℃，优选：流速为1.0～1.5ml/min，柱温为35℃。

7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述流速为1.0或1.1ml/min。

8.如权利要求1所述的检测方法，其特征是：步骤c)所述梯度洗脱程序为：0～15min，90％→65％a，15～25min，65％→20％a，25～31min，20％a，31.01～40min，90％a。

9.如权利要求1所述的检测方法，其特征是：所述供试品溶液的色谱图中呈现与系统适用性溶液色谱图中有关物质色谱峰保留时间相对应的色谱峰，即供试品中含有相应有关物质。

10.一种盐酸丙卡特中间体有关物质的含量测定方法，其特征在于：具体操作步骤如下：

1)按权利要求1～9任意一项所述方法检测；

2)计算有关物质含量，计算公式如下：

其中，xi％：供试品中有关物质的含量，ai：供试品溶液中有关物质峰面积，a：供试品溶液中所有峰面积之和，fi:有关物质的校正因子。

11.根据权利要求10所述的测定方法，其特征在于：所述有关物质为杂质a，其校正因子为1.48，有关物质为杂质b，其校正因子为0.39，有关物质为杂质c，其校正因子为0.52。

技术总结

本发明公开了一种盐酸丙卡特罗中间体有关物质的检测方法，具体步骤如下：a、供试品溶液制备：取8‑苄氧基‑5‑((2‑异丙氨基)丁酰基)喹啉‑2(1H)‑酮，加乙腈水溶液溶解；b、系统适用性溶液的制备：取8‑苄氧基‑5‑((2‑异丙氨基)丁酰基)喹啉‑2(1H)‑酮对照品和有关物质对照品，用乙腈水溶液溶解；c采用高效液相色谱法检测供试品溶液和对照品溶液。本发明检测方法可以将8‑苄氧基‑5‑((2‑异丙氨基)丁酰基)喹啉‑2(1H)‑酮与其有关物质峰有效分离，准确测定有关物质含量，测定结果稳定可靠，专属性强。

技术研发人员：王春燕;李连明;刘治国;余乐乐;王继英

受保护的技术使用者：成都惟邦药业有限公司

技术研发日：2019.12.31

技术公布日：2020.05.05